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                  案例分享

                  J Clin Endocr Metab丨嚴重Graves眼病Th1/Th17“雜合”表型與脂代謝改變的相關性證據

                  發布日期:2021.03.09



                  導讀


                  Greves眼?。℅O)是最常見的眼眶疾病,嚴重的可能導致失明和致殘。脂質代謝是調節Th17細胞在正常和致病條件下的關鍵因素,因為脂肪酸的合成可以抑制人和小鼠Th17細胞的形成并且大大促進了抗炎T細胞表型的形成,比如高血清膽固醇是GO發病的最危險因素之一,所以研究效應T細胞表型與血清脂代謝的潛在關聯是非常有意義的。

                  2020年4月,來自上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院周慧芳教授及其團隊在Journal of Clinical endocrinology & Metabolism在線發表了Evidence for Associations Between Th1/Th17 “Hybrid” Phenotype and Altered Lipometabolism in Very Severe Graves Orbitopathy(IF=5.49)的文章,在這項研究中作者采用流式細胞技術和脂質組學技術探究了Th1/Th17細胞系在GO患者發病機制的特征。


                  應用案例
                  Graves眼病Th1/Th17“雜合”表型與脂代謝的相關性


                  01
                  材料和流程

                   患者和對照組



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                  細胞的制備和篩選

                  采血后1小時內采用Ficoll-Hypaque(GE-Healthcare)密度梯度法從所有受試者中分離出外周血單個核細胞(PBMCs)。純化后的PBMCs在添加1%青霉素/鏈霉素的X-VIVO15培養基中培養。然后在37℃下用佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯和離子霉素在GolgiPlug存在下刺激細胞6小時,然后用流式細胞儀篩選。

                  02
                  試驗結果

                  1、細胞因子譜揭示了嚴重Graves眼病患者Th17細胞系的可塑性

                  研究者通過檢測患者和健康對照組中的Th1、Th17和Th17.1細胞的細胞內IFN-γ和IL-17A表達水平,發現在嚴重的GO患者、中重度GO患者和GD患者中觀察到產生IFN-γ的Th1細胞的比例顯著增加,而且Th1細胞也更豐富。但是在GO患者總的Th1細胞產生的頻率最低,與其他組相比,本組產生IFN-γ的Th1細胞的比例最高。與健康對照組相比,重度GO患者、中重度GO患者和GD患者產生IL-17A的Th17細胞的比例顯著升高,但是后面兩個患者隊列的Th17細胞總數沒有增加。此外,在所有組中,重度GO患者的Th17.1細胞產生的IFN-γ最多,中重度GO患者的Th17.1細胞產生的IL-17A最多,重度和中重度GO患者的IL-17A和IFN-γ雙重產生Th17.1細胞的比例顯著增加。綜上所述,重度GO、中重度GO和GD的效應T細胞免疫可能分別由Th17細胞或Th1細胞亞群所控制,并反映了Th17細胞系在GO發病進展過程中的實質功能可塑性。



                  圖片關鍵詞

                  圖1 重度GO和中重度GO患者及正常對照組效應T細胞的免疫表達


                  2、重度Graves眼病患者Th17.1細胞與血脂代謝的相關性研究

                  接下來研究者用UHPLC-QTOF-MS平臺對重度GO患者進行脂質組學分析,GC治療前后共篩選和鑒定了79種不同的脂質物質。與治療前相比,治療后73種脂質代謝下調,6種上調。主要分為:PE、PC、FA、TAG、PI、HexCers等。使用ChemRICH分析顯示,基于79種不同的脂質代謝產物,有9種脂質代謝途徑發生了顯著改變,其中TAG的幅度和趨勢最為明顯。此外,研究者還考察了治療后GC敏感組和GC耐藥組脂質代謝產物的差異,GC耐藥患者血清中有11種物質上調??偟膩碚f,GO患者Th17.1細胞周圍脂質代謝的改變可能在GC治療期間調節Th17.1細胞的功能和生存。




                  圖片關鍵詞

                  圖2  糖皮質激素治療Graves眼?。℅O)患者的脂代謝異常

                  3、糖皮質激素抵抗、重度Graves眼病患者的球后組織以th17.1細胞免疫為主

                  最后,研究者進一步收集了6例手術后患者的GC抵抗、GO患者眼眶結締組織,免疫組化結果顯示,與GC敏感患者相比,GC抵抗患者的球后脂肪細胞纖維帶或者血管周圍存在IFN-γ+淋巴細胞浸潤的現象,研究者還對GC耐藥和敏感患者眼眶浸潤細胞進行分類,WB顯示GC耐藥患者的Th17細胞表達了更多的轉錄因子TbetSATAT4,突出了Th17細胞轉化成Th1的作用,GC敏感患者血清中的Th17表型保持穩定。GC耐藥患者的眼眶提取物比GC敏感含有更高水平的TAG,血清中的水平也顯著升高,而且在在培養抗GC患者血清中的Th17細胞中觀察到TbetSTAT4的表達增加,表現出Th1表型,與單獨培養的Th17細胞相比,GC敏感患者血清中的Th17表型也保持穩定。




                  圖片關鍵詞

                  圖3  AGs促進GO患者產生干擾素-γ的輔助性T細胞17.1(Th17.1)功能


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                  結論與討論

                  綜上所述,本文的研究首次為GD患者從Th1細胞免疫應答向Th17細胞免疫應答的轉變過程提供了證據。更重要的是,研究者揭示了Th17.1細胞致病性與嚴重GO活動和發展之間的潛在相關性,并為了解Th17.1細胞功能與嚴重GO患者脂質代謝特征之間的關系奠定了基礎。進一步研究了脂質代謝變化對GO中Th17.1細胞功能的影響,改善脂肪代謝和減輕嚴重GO患者Th17.1細胞炎癥可能有助于降低GC或免疫抑制抵抗的程度。


                  ? 文獻出處

                  FANG Sijie, ZHANG Shuo, HUANG Yazhuo, ZHOU Huifang*, FAN Xianqun*, et al. Evidence for associations between Th1/Th17 "Hybrid" phenotype and altered lipometabolism in very severe graves orbitopathy. Journal of Clinical endocrinology & Metabolism2020, 105(6): dgaa124.



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