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                  代謝組學樣本收集全面指南!

                  發布日期:2021.03.09


                         樣本采集是代謝組學研究的第一步,只有對樣本進行正確、合理地收集、保存,才能確保后續的檢測和分析更加真實可靠??捎脕碜龃x組學的樣本多種多樣,常見的有以下幾大類: 動物或臨床血樣(血清、血漿)、尿液、糞便、組織,植物器官、細胞及其培養基、微生物細菌、真菌及其發酵液等。今天,小編帶大家看一下這些樣本要怎樣收集保存呢?


                  血液樣本收集


                  1.血漿樣本收集:

                  (1)從合適的靜脈采集血液(典型10mL)到標記的肝素鋰血漿收集管中(肝素鋰用作抗凝

                  劑)。

                  (2)立即于4 °C離心(3000g)20min,上清液即為血漿。

                  (3)離心完畢,取出血漿收集管,取上清液(血漿),分等份(0.5mL或0.1mL),轉移到凍存管中(冰上),旋蓋。

                  (4)保存于-80℃冰箱。寄樣需足量干冰。

                  2.血清樣本收集:

                  (1)從合適的靜脈采集血液(典型10mL)到血清收集管中。

                  (2)將血清收集管冰水?。?℃)凝集至少1h(2h以內),記錄凝集時間。

                  (3)將血清收集管放到冷凍離心機中低溫(4℃)離心15min(2500 g);。

                  (4)離心完畢,取出血清收集管,取上清液,分等份(0.5mL0.1mL),轉移到凍存管中

                  (冰上),旋蓋。

                  (5)保存于-80℃冰箱。寄樣需足量干冰。


                  圖片關鍵詞


                  注意:

                  (1血液離開動物或人體后,應盡快開展血清、血漿的分離,并嚴格按照操作說明進行。

                  (2)采集到的血清為黃色透明液體、血漿為淡黃色半透明液體,如果發現樣本中是紅色,說明在已經發生了了溶血現象,樣本需重新制備。

                  (3)血清與血漿的主要區別在于血清中不含纖維蛋白原。血清和血漿中脂質,氨基酸,核苷酸等代謝譜存在差別。



                  糞便樣本收集


                  1.人糞便:

                  (1)用無菌勺挖取新鮮的,排泄中后部的內側糞便(避免尿液及其他壁對樣本污染);

                  (2)分裝樣本20mg/管。

                  (3)迅速放入液氮中冷凍處理至少15min.

                  (4)-80℃冰箱凍存。寄樣需足量干冰。

                  2.小鼠糞便:

                  (1)待測的小鼠排便后,立即用滅菌的鑷子夾取。

                  (2)收集小鼠糞便6-8粒,轉入凍存管。

                  (3)為避免反復凍融,樣本可用無菌棒混合均勻后20mg/管進行多管分裝。

                  (4)-80℃冰箱凍存。寄樣需足量干冰。



                  尿液樣本收集


                  尿液:

                  (1)晨起中段尿(臨床)或晨間1h尿(動物)直接分裝到離心管中,每管1mL。

                  (2)添加質量體積為1/100(w/v)的疊氮化鈉。

                  (3)收集完尿液樣本后,用液氮淬滅15 min后,再分裝多管。

                  (4)-80 ℃冰箱凍存。寄樣需足量干冰。



                  組織樣本收集


                  組織樣本:

                  (1)如果組織上有血,先用用生理鹽水漂洗掉。

                  (2)根據具體實驗設計取特定的部位,再用生理鹽水沖洗干凈。

                  (3)用干凈的無塵吸水紙吸干水分,20mg/管裝入標記好的離心管中。

                  (4)迅速放入液氮中冷凍淬滅至少15min.

                  (5)-80℃冰箱凍存。寄樣需足量干冰。 



                  腦脊液、關節液和淋巴液等樣本收集


                  腦脊液、關節液和淋巴液等:

                  (1)1000rpm-2000rpm 離心 5min(或使用 0.22um 濾膜過濾)。

                  (2)取上清分裝入標記好的離心管中(保證單個樣本量在20μL以上)。

                  (3)-80℃冰箱凍存。寄樣需足量干冰。



                  植物樣本收集


                  植物樣本:

                  (1)取整片葉片/一段莖/一朵花/根,迅速用PBS 漂洗去掉泥土雜質等,部分果實需切塊或液氮研磨。

                  (2)放入離心管或錫箔紙中并標記(單個樣本量在20mg以上),迅速放入液氮中冷凍處理至少 15min.

                  (3)取出后迅速放入自封袋中(每組一袋),在自封袋中放入標簽紙注明樣本信息。

                  (4)-80℃冰箱凍存。寄樣需足量干冰。



                  細胞樣本收集


                  1.懸浮細胞:

                  (1)連同培養基轉移到進口的15 mL的離心管中,低速離心,使細胞沉淀于離心管的底部(達到1*106個數量以上細胞為宜)。

                  (2)倒掉培養基(盡量倒干凈)后(可以用PBS快速清洗一次,再次離心,倒掉PBS(盡量倒干凈)。

                  (3)將離心管的尖端插入液氮中,淬滅細胞。

                  (4)-80度冰箱凍存,寄樣需足量干冰。 

                  2.貼壁細胞:

                  (1)快速倒掉培養基,倒入PBS(若用移液槍加,則靠著培養皿壁加入,以免將細胞沖起),清洗一次,倒掉PBS.

                  (2)用移液器吸盡殘余的PBS,將培養皿底部(外壁)接觸液氮,淬滅細胞。

                  (3)加入500微升甲醇-水(4:1,V/V),用細胞刮刀將細胞刮下,用移液槍轉移至1.5 mL的離心管中。

                  (4)再向培養皿中加入500微升甲醇-水(4:1,V/V),將剩余的細胞盡量全部轉移至1.5 mL的離心管中。

                  (5)-80冰箱凍存。寄樣需足量干冰。



                  微生物樣本收集


                  微生物樣本:

                  1)連同培養基轉移到進口的15 mL的離心管中,低速離心,使細菌沉淀于離心管的底部(達到1*108個以上數量細菌為宜)。

                  (2)倒掉培養基(盡量倒干凈)后,用PBS溶液快速清洗一次,4 ℃ 1000 g離心10 min收集菌體,棄上清。

                  (3)將離心管的尖端插入液氮中,淬滅細菌1 min.

                  (4)-80冰箱凍存。寄樣需足量干冰。



                  微生物培養液樣本收集


                  微生物培養液:

                  方法一:

                  (1)培養好的菌液混勻后,取2mL菌液,用0.2μm孔徑的過濾膜進行快速抽濾,去除菌體。

                  (2)將濾液按 50uL/管進行分裝(單個樣本量在20μL以上)。

                  (3)-80冰箱凍存。寄樣需足量干冰。

                  方法二:

                  (1)培養好的菌液混勻后,取2mL菌液。

                  (2)3000rpm,4℃離心10min,取上清分裝單個樣本量在20μL以上)。

                  (3)-80冰箱凍存。寄樣需足量干冰。


                  補充說明:以上僅為常規樣本收集和保存方法,特殊樣本或特殊分析服務(如輔酶A測定等特殊物質的靶向定量,或如氧化脂肪酸,氧化還原代謝物等特殊服務),請添加下方譜領生物服務號咨詢詳情并獲取方案。

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