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                  蛋白組定量

                  iTRAQ、 TMT蛋白質定量

                  ? 蛋白質組標記定量iTRAQ&TMT

                  研究不同生理和病理條件下細胞內蛋白質的含量和狀態變化是比較蛋白質組學的核心內容。iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)和 TMT(Tandem Mass Tags)分別是由美國 AB Sciex 公司和 Thermo 公司研發的多肽體外標記定量技術,是目前廣泛運用的兩種標記定量蛋白質組技術,分別通過與氨基酸末端氨基以及賴氨酸殘基的游離氨基結合,實現對多肽的標記,經高精度質譜儀串聯分析,可同時比較多達8種樣品之間的蛋白表達量,并通過不同分子量的試劑對不同來源樣品進行標記,實現不同樣品間蛋白質組比較的目標。


                    服  務  優  勢  

                  ? 重復性好:組間重復性可達90%以上;

                  ? 靈敏度高:分級分離,降低樣品復雜度,檢測出較低豐度蛋白;

                  ? 數據豐富:一次實驗可得到上千個蛋白的定性和定量信息;

                  ? 體外標記技術,適用于大部分生物樣本的蛋白質差異分析:胞漿蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等;

                  ? 自動化程度高:液質連用,自動化操作,分析速度快,分離效果好;

                  ? 通量高:iTRAQ可同時標記8個不同樣品,TMT最多可標記10個樣品,特別適用于采用多種處理方式或來自多個處理時間的樣本的差異蛋白分析;

                  ? 結果可靠準確:定性與定量同步進行,同時得出鑒定和定量結果,重復樣品間的蛋白表達量相關性高。



                  應用方向


                  藥物作用靶點研究;

                  疾病標志物篩選;

                  植物脅迫/抗逆研究;

                  物種蛋白質草圖構建。


                    服  務  流  程 

                  圖片關鍵詞

                  iTRAQ 8-plex定量蛋白組學分析流程






                  樣本量要求


                  圖片關鍵詞



                  技術參數


                  檢測平臺:

                  Thermo Scientific Q Exactive 圖片關鍵詞


                  蛋白鑒定總數:

                  iTRAQ:5000以上

                  TMT:8000以上


                  服務周期

                  50個工作日


                  服務內容


                  圖片關鍵詞



                  分析流程


                  圖片關鍵詞

                  • 原始數據質控;

                  • 蛋白質譜搜庫檢索;

                  • iTRAQ鑒定:包括鑒定結果統計、重復性分析、Unique肽段數分布、肽段長度分布、蛋白覆蓋度分布;

                  • iTRAQ定量:包括定量信息統計、蛋白質豐度比(FC)分布、表達量層次聚類分析;

                  • 蛋白質功能注釋:包括GO注釋、COG注釋和Pathway代謝通路注釋;

                  • 差異蛋白的富集分析:包括差異蛋白的GO富集分析、差異蛋白的Pathway富集分析;

                  • 定制化分析:PPI分析。



                  結果展示


                  差異蛋白火山圖

                   

                  差異蛋白聚類熱圖



                   

                  GO富集柱狀圖

                   

                  差異蛋白KEGG富集氣泡圖


                   

                  KEGG富集通路圖

                   

                  蛋白互作網絡圖




                  文獻案例


                  • Wang K, Shan Z, Duan L, et al. iTRAQ-based quantitative proteomic analysis of yamanaka factors reprogrammed breast cancer cells. Oncotarget, 2017, 8(21):34330-34339.




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